ELISA試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中每一個(gè)步驟都尤為重要，細(xì)節(jié)不容忽視，它是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵與否，以下是小編為您整理的部分注意事項(xiàng)：
1.吸取液體時(shí)速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
2.手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
3.加樣后及時(shí)放人孵箱，標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?，難以清洗*。
4.作時(shí)必須戴手套，穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。
5.同批號(hào)試劑組分不得混用。
6.洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
7.要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性，可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定，每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和zui低量程進(jìn)行確定。
8.在使用微量加樣器時(shí)，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
9.檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械，具有一定總結(jié)和分析問(wèn)題的能力，對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。
10.操作前仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方，反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)，比如洗板次數(shù)的掌握等。
11.評(píng)估試劑的實(shí)用性，試劑的穩(wěn)定與否，對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進(jìn)行陰、陽(yáng)對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn)，判定試劑符合要求后方可使用。
12.加樣要準(zhǔn)確、快速。加樣不準(zhǔn)確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結(jié)果。另外，顯色的深淺及A值的測(cè)定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)，所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn)，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露在外，尤其室溫過(guò)高時(shí)，保存期會(huì)縮短甚至失效。
13.使用校對(duì)過(guò)的微量移液器，排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測(cè)尤為重要
14.嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間，顯色時(shí)間過(guò)短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過(guò)少，易出現(xiàn)假陰性。超過(guò)顯色要求時(shí)間后顯色，應(yīng)判為假陽(yáng)性，這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色，不可報(bào)陽(yáng)性，這可能是本底顯色的結(jié)果。
15.洗滌*，洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽(yáng)性。另外，洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽(yáng)性。
16.嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，酶失活；反應(yīng)時(shí)間過(guò)短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
